产品货号：
MT0056
中文名称：
单链DNA/RNA环化连接酶
英文名称：
ssDNA/RNA CircLigase
产品规格：
2000U|20KU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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单链DNA/RNA环化连接酶为热稳定的DNA/RNA连接酶，不依赖于ATP，可催化单链DNA或单链RNA的分子内环化。环化反应中，要求催化底物单链DNA/RNA具有5'-磷酸基团和3'-OH基团。对于大于15nt的单链底物，该酶都能高效的连接。
一个活性单位是指在60℃条件下，1小时内催化1pmol 5'-磷酸化的ssDNA底物环化所需的酶量。
| 组分 | 2000U | 20KU |
| ssDNA/RNA CircLigase(100U/μL) | 20μL | 200μL |
| 2.5×CircLigase Buffer 2 | 0.2mL | 1mL×2 |
| 50mM MnCl2 | 0.5mL | 0.5mL |
保存：-20℃，有效期3年。
- 环化底物ssDNA或RNA必须带有5'磷酸基团，3'端含有OH。该酶对底物的末端碱基，具有偏好性。推荐5'首碱基为G（连接效率G>A,T和C几乎不连接）。3'末端推荐T或A碱基（T≥A>>G/C）。
- 环化体系中的ATP浓度高于20μM以上时会极大抑制环化效率，甚至导致环化失败。因此建议底物为纯化产物。
- 该酶在50～70℃条件下均具有活性，最佳反应温度为60℃，必要时可自行调整。
- 本酶主要进行分子内环化连接，分子间的连接未检测到。
- 本酶对ssDNA和RNA的环化效率极高，多数情况下，90%以上的底物被环化。未被环化的ssDNA可通过加入0.25U/μl的Exonuclease I，37℃消化15min去除，以获得高纯度的环化ssDNA。未环化的ssRNA，我司将稍后给出去除方案。
- 本酶可以连接15nt以上的核苷酸，我司测试的最长ssDNA为110nt（连接效率>90%）。
- 在小体系实验时注意体系的蒸发，可加入矿物油以防止蒸发。
- 按下表加入各成分配制反应体系：
成分 用量 CircLigase(100U/μL) 1μL 5'磷酸化ssDNA/RNA 10～100pmol 2.5×CircLigase Buffer 2 8μL 50mM MnCl2 1μL ddH2O 至20μL - 60℃孵育60min进行环化反应。
- 失活反应：反应结束后，可加入终浓度10mM EDTA终止反应。或采用加热方式85℃ 10min加热失活。
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