产品货号：
MT0056
中文名称：
单链DNA/RNA环化连接酶
英文名称：
ssDNA/RNA CircLigase
产品规格：
2000U|20KU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是一种热稳定的DNA/RNA连接酶，不依赖于ATP，可催化单链DNA或单链RNA的分子内环化。环化反应中，要求催化底物单链DNA/RNA具有5'-磷酸基团和3'-OH基团。对于大于15nt的单链底物，该酶都能高效的连接。
65℃条件下，1小时内催化1pmol 5'-磷酸化的ssDNA底物环化，所需的酶量定义为1U。
| 组分 | 2000U | 20KU |
| ssDNA/RNA CircLigase(100U/μL) | 20μL | 2000μL |
| 10×CircLigase Buffer | 500μL | 500μL |
| 50mM MnCl2 | 250μL | 250μL |
保存：-20℃，有效期3年。
- 环化底物ssDNA或RNA必须带有5’磷酸基团，3’端含有OH。
- 环化体系中的ATP浓度高于20μM以上时会极大抑制环化效率，甚至导致环化失败。因此建议底物为纯化产物。
- 由于本酶提高了耐热性，在65℃条件下进行连接反应，在我司的测试中Betain无益于连接效率提升。
- 本酶主要进行分子内环化连接，分子间的连接未检测到。
- 本酶对ssDNA和RNA的环化效率极高，多数情况下，90%以上的底物被环化。未被环化的ssDNA可通过加入5U的Exonuclease I，37℃消化15min去除，以获得高纯度的环化ssDNA。未环化的ssRNA，我司将稍后给出去除方案。
- 本酶可以连接15nt以上的核苷酸，更长的产物连接参数，我司将稍后给出测试报告及protocol。
- 对于连接底物量较少的实验来讲，推荐缩小体系，而不是减少酶的用量。在小体系实验时注意体系的蒸发，可加入矿物油以防止蒸发。
- 按下表加入各成分配制反应体系：
成分 用量 CircLigase(100U/μL) 1μL 5'磷酸化ssDNA/RNA 10-100pmol 10×CircLigase Buffer 2μL 50mM MnCl2 1μL ddH2O 至20μL - 65℃孵育1h进行环化反应。
- 失活反应：反应结束后，可加入终浓度10mM EDTA终止反应。或采用加热方式85℃ 10min加热失活。
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